操作步驟:

實(shí)驗開(kāi)始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應對樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測范圍，計算時(shí)再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實(shí)驗結果有效性，每次實(shí)驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時(shí)藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗結果的準確性，底物反應時(shí)間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(cháng)依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱(chēng)：二氫黃酮醇還原酶(DFR)試劑盒品牌

規格：24樣 48樣

貨號：AS372

檢測方法：可見(jiàn)分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類(lèi)：苯丙烷代謝途徑

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質(zhì)期：6個(gè)月。本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

所需的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實(shí)驗前選取 2 個(gè)樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗流程，避免實(shí)驗

樣本和試劑浪費！

1、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取

② 細菌/細胞樣本：

先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬(wàn)細菌或細胞加入 1mL

提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；

12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。

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